Wykrywanie patologicznego białka prionowego w nabłonku węchowym w sporadycznej chorobie Creutzfeldta-Jakoba ad 6

Próbki około 300 .g błony śluzowej dróg oddechowych (ścieżki 2 i 3) i błona węchowa (ścieżki 5 i 6) strawiono 20 .g proteinazy K na mililitr i nie znaleziono PrPSc opornej na proteazę; niespecyficzny prążek jest widoczny w ścieżkach 5 i 6. Przeciwciało monoklonalne 3F4 zastosowano jako sondę. W panelu B, analiza immunoblot supernatantu (ścieżki i 2) i peletki kwasu sodowo-fosforowolframowego (ścieżki 3 i 4), przed (trawienie i 3) i po (trawienie 2 i 4) trawienia proteinazą K, wykazała obecność PrPSc opornej na proteazę w błonie śluzowej węchowej z Pacjenta 6. Osad otrzymano z 100 mg tkanki (ciężar mokry). Po traktowaniu proteinazą K w stężeniu 20 .g na mililitr przez 20 lub 10 minut, PrPSc był niewykrywalny w analizie immunoblotów homogenatów błony węchowej i oddechowej od pacjentów ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba i od kontroli (Figura 4A). Aby zwiększyć czułość metody wykrywania PrPSc, przetestowaliśmy zdolność kwasu fosfowolframowego sodu, który skutecznie wiąże się z chomika i ludzkim PrPSc, 11,25, aby wytrącić PrPSc z błony śluzowej nosa pacjentów ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba. Badanie Western blot supernatantu z homogenatów błony węchowej wykazało duży prążek PrP migrujący przy około 33 kD, który strawiono proteinazą K (Figura 4B, ścieżki i 2). Przeciwnie, badanie Western blot frakcji nierozpuszczalnej, odzyskanej w osadzie, wykazało cztery główne prążki reaktywne wobec PrP w zakresie około 23 do 35 kD. Traktowanie nierozpuszczalnej frakcji proteinazą K wygenerowało trzy główne prążki PrPSc oporne na proteinazę K (Figura 4B, ścieżki 3 i 4), z nieglikozylowanym fragmentem około 22 kD u wszystkich pacjentów homozygotycznych pod względem metioniny i około 21 kD w pacjent, który był homozygotyczny pod względem waliny w kodonie 129. U czterech pacjentów błona węchowa zawierała poziomy PrPSc równoważne w przybliżeniu 3 procentom z tych znalezionych w homogenatach z węchowej bulwy. Immunoreaktywności PrPSc nie wykryto ani w błonie śluzowej dróg oddechowych od pacjentów ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba, ani w błonie śluzowej węchowej i oddechowej od osób kontrolnych.
Regionalna dystrybucja PrPSc w obszarach węchowych, kory nowej, jąderek podkorowych i móżdżku
Rycina 5. Rycina 5. Rozmieszczenie wewnątrzkomórkowe nieprawidłowego białka prionowego (PrPSc) w tkance mózgowej od pacjentów ze sporadyczną chorobą Creutzfeldta-Jakoba. Western blot z monoklonalnym przeciwciałem 3F4 wykazuje duże ilości PrPSc w kory nowej, korze śródwęchowej i węchowej kory pierwotnej Pacjenta (Panel A). PrPSc jest obecny w węchowej błonie i ciele, ale nie w nerwie wzrokowym (panel A). W tkankach od Pacjenta 9 (Panel B) poziomy PrPSc są najwyższe w móżdżku; białko jest obecne w szlaku węchowym, ale praktycznie nieobecne w korze nowej. Każda ścieżka pokazuje wyniki immunoblottingu z 300 .g homogenatu trawionego proteinazą K; wartości PrPSc są podane jako względny procent najwyższej uzyskanej wartości.
Po traktowaniu proteinazą K w stężeniu 100 .g na mililitr na jedną godzinę, pacjenci, którzy byli homozygotyczni pod względem metioniny, mieli największe ilości PrPSc w korze nowej, zgodnie z oczekiwaniami, z mniejszymi ilościami we wzgórzu, zwojach podstawy i móżdżku (fig. 5A)
[przypisy: psychoterapia zabrze, terapia uzależnień warszawa, kosmetyki ziołowe ]
[hasła pokrewne: gumtree oddam za darmo poznań, olx łęczna, chirurgia twarzowo szczękowa ]